Al día siguiente, escurrir suavemente el exceso de la solución SDH y transferir la membrana a otra placa de Petri que contenga papel de filtro ligeramente humedecido. A continuación, aplicar suavemente por goteo la solución de azul de triapan o azul de metilo 0,05% (m / v) en glicerol acidificado. Dejar en reposo durante aproximadamente 2 horas.
Escurrir suavemente la solución de azul de tripan o de metilo y observar en un microscopio estereoscópico. Realizar la evaluación de la estructura y viabilidad de la red, crecimiento micelial, ocurrencia y formación de anastomosis simbiótica.
Etapa 10
Etapa 09
Si se observa el desarrollo de la red de micelio a lo largo de la membrana, transferir las membranas a otra placa de Petri y, cuidadosamente, aplicar por goteo la solución SDH de trabajo sobre la membrana. Cubra con un tejido oscuro y deje en reposo por una noche.
Transferir los sándwich a una placa de Petri, enterrándolos en arena lavada estéril. Sellar las placas con película de PVC y colocar en vertical, cultivar en estufa BOD a 25 ° C de 07 a 30 días.
Después de la remoción de las esporas, transfiera la planta a otra membrana del tipo Millipore (0,45μm) de 14 cm de diámetro cortada según la figura. Se forma otro "sándwich" cubriendo con otra membrana de la misma dimensión.
Si se constata la colonización de las plantas, retire las membranas y transfiera las plantas a una placa de Petri. Bajo la lupa, retire las esporas con la ayuda de una pinza, dejando la planta sólo con el micelio externo y las estructuras internas
Transferir los sándwiches a un envase con arena lavada estéril. Colocar los envases dentro de una bolsa de plástico transparente para que las plantas sequen. Cultivar en estufa BOD a 25 ° C durante 30 días o hasta que se constate la
Inserte una planta, previamente germinada en arena lavada estéril. En general se utilizan como hospedadoras en este sistema de sándwich plántulas de achicoria, pimiento, perejil, lechuga o tomate. Colocar cuidadosamente una nueva membrana sobre cada membrana que contiene las esporas e la planta.
Transferir las esporas a las membranas del tipo Millipore (0,45μm). Se recomienda distribuir las esporas de manera circular.
Colocar un papel de filtro dentro de una placa de Petri de 14 cm de diámetro. Humedecer con agua destilada y luego distribuir las membranas el tipo Millipore (0,45μm).
Etapa 08
Etapa 07
Etapa 06
Etapa 05
Etapa 04
Etapa 03
Etapa 02
Etapa 01
Anastomosis simbiótica en sistema sandwich
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