Después de obtener el número total, líneas verticales + horizontales, de "SI" y de "NO", calcule el porcentaje de colonización micorrízica (% CM) a través de la siguiente fórmula.
Se recomienda evaluar como mínimo 100 puntos de intersección entre raíces y líneas verticales y horizontales.
Etapa 09
Nota 01
A través de este método Grid Line (Giovannetti and Mosse, 1980) es posible también estimar la longitud total de raíces y la longitud de raíces colonizadas por los HMA.
 
Para ello es necesario:
 
1. Colectar todas las raíces de la planta y luego separar 0,5 gramos de raíces finas y limpias para la coloración.
 
2- Pesar el resto de las raíces (Peso Fresco- PF2) y colocar en estufa a 65 ° C durante 48 horas y pesar para obtener el Peso Seco (PS2).
 
3. Evaluar la colonización (% CM1) con placa de Petri cuadriculada 1,27 cm x 1,27 cm, obteniendo el número total de intersección entre las raíces y las líneas verticales y horizontales, el número de puntos de intersección donde se registró presencia de colonización ("SI").
 
4- Como parte de las raíces (PF1 = 0,5 g) se utilizaron para la coloración, es necesario estimar el peso seco (PS1) de estas raíces:
 

PS2/PF2 = PS1/PF1 
 
PF2 x PS1= PF1 x PS2    
 
PS1= PF1 x PS2/PF2
 

5- Determinar el porcentaje de colonización en las raíces no teñidas:
 
% CM1 / FS1 =% CM2 / FS2
 
FS1 x %CM2= %CM1 x FS2
 
%CM2 = %CM1 x FS2/FS1
 
6- Para calcular la longitud total de raíces colonizadas basta con sumar el % CM1 con el % CM2.
Después de evaluar todas las líneas horizontales gire (90 °) la placa de Petri (a) o muévala hacia adelante y hacia atrás (b) para evaluar las líneas verticales.
Todos los puntos de intersección entre los fragmentos de raíces y las líneas, horizontales y verticales, de la placa de Petri deben ser evaluados. Para ello mueva la placa en el sentido horizontal a la derecha o a la izquierda. Cambie de línea después de finalizar la anterior.
Para ser contado como "SI", la estructura del hongo debe estar sobre el punto de intersección (círculo punteado), incluso cuando están muy cerca, éstas se cuentan como "NO".
Si en el punto de intersección hay presencia de colonización (presencia de cualquier estructura del hongo: hifa, espora, vesícula, arbúsculo), se cuenta como "SI", de lo contrario se cuenta como "NO".
Mueva la placa de Petri en el sentido horizontal hacia la derecha o hacia la izquierda hasta que encuentre un punto de intersección entre un fragmento de raíz y una línea horizontal de la placa.
Bajo el microscopio estereoscópico, iniciar la evaluación por la extremidad de 1º línea horizontal. La evaluación consiste en observar y contar los puntos de intersección entre los fragmentos de raíces y las líneas horizontales de la placa.
Después de la realización del protocolo de clarificación y tinción de las raíces, distribuirlas homogéneamente sobre la placa de Petri cuadriculada (1,27 cm x 1,27 cm). No deje con exceso de agua.
Dibuje en la computadora una circunferencia del tamaño de la placa de Petri que  utilizará. Complete la circunferencia con una cuadrícula con cuadrados de 1,27 cm x 1,27 cm. Imprima en hoja de acetato (transparente) con alta calidad. Cortar y pegar en la base de la placa de Petri.
Nota 02
Etapa 08
Etapa 07
Etapa 06
Etapa 05
Etapa 04
Etapa 03
Etapa 02
Etapa 01
COLONIZACIÓN MICORRÍZICA: "Grid Line"
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