Cuando no existe la posibilidad de procesamiento inmediato de las raíces, éstas pueden ser almacenadas en frascos con tapa, conteniendo una solución de alcohol etílico 70% (v / v).
Cuando las raíces se almacenan en una solución de alcohol etílico del 70% (v / v), deben volver a lavarse en agua corriente antes de ser teñidas.
Las soluciones colorante de azul de metileno 0,05% (m / v) y de glicerol acidificado se pueden reutilizar algunas veces como colorante. Para ello, filtrar y añadir 0,1 g / L de azul de metileno a la solución de colorante utilizada y 0,5 g / L de azul de metileno en la solución de glicerol acidificado.
Coloque las cápsulas en un vaso de precipitado que contenga una solución de glicerol acidificado, sin el colorante, o distribuir la solución en los tubos para que ocurra la decoloración de las células vegetales que han retenido exceso de colorante.
Colocar las cápsulas en un vaso de precipitado que contenga una solución de azul de tripan o azul de metileno 0,05% (m / v) en glicerol acidificado (mezcla de 450 mL de agua, 500 ml de glicerol y 50mL de HCl 1% más 0,5 g de azul de tripan o azul de metileno), o distribuir la solución en los tubos.
Verter toda la solución de HCl. No lavar las raíces, ellas necesitan estar acidificadas para que el colorante actúe en el rango del azul.
Verter la solución de azul de tripán filtrándola con la ayuda de un embudo que contenga papel de filtro y algodón. La solución de tinción puede reutilizarse.
Calentar sobre placa calefaccionada o en Baño de María (90 ° C) por 10 a 30 minutos. También puede ser autoclavado durante 10 minutos o dejar en reposo por 1 noche. Cuando se utiliza el mechero de Bunsen, no es posible controlar la temperatura; por lo tanto debe apagar el fuego cada vez que la solución empiece a hervir.
Coloque las cápsulas en un vaso de precipitado que contenga una solución de HCl 1%, o distribuir la solución en los tubos. Dejar por lo menos 2 horas.
Verter toda solución de agua oxigenada alcalina y lavar bien las raíces con agua corriente.
Si las raíces son muy oscuras, coloque las cápsulas en un vaso de precipitado que contenga una solución de agua oxigenada alcalina (obtenida con la mezcla de 100 mL de la solución de hidróxido de amonio 20% (m / v) con 1000 mL de la solución de peróxido de hidrógeno 3% M / v, esta mezcla debe prepararse en el momento de su uso) o distribuir la solución en los tubos. Dejar por 15 a 45 minutos.
Verter toda solución de KOH y luego lavar bien con agua corriente.
Calentar sobre placa calefaccionada o en Baño de María (90 ° C) por 10 a 60 minutos. También puede ser autoclavado durante 10 minutos o dejar en reposo por 1 noche. Cuando se utiliza el mechero de Bunsen, no es posible controlar la temperatura; por lo tanto debe apagar el fuego cada vez que la solución empiece a hervir. Controlar el tiempo y observar el estado de las raíces, el KOH puede destruir las células de las raíces o las estructuras del hongo.
Coloque las cápsulas en un vaso de precipitado que contenga una solución de KOH 2,5%, o coloque la solución en los tubos.
Pese 0,5 gramos de raíces finas y limpias, colóquelas en cápsulas plásticas (casettes histológicos) o en tubos de ensayo.
Separe las raíces de la parte aérea. Retirar las raíces más finas y tiernas. Lavar las raíces con agua corriente para retirar las partículas de suelo.
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The World of Arbuscular Mycorrhizal Fungi
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