My work

En caso de que la diversidad de especies de la muestra sea desconocida es necesario recoger también el material retenido en el tamiz de 0,42mm en una placa de Petri para posterior verificación de la presencia de esporas o esporocarpos que hayan quedado retenidos en este tamiz.

Con ayuda de una piseta transfiera el material retenido en el tamiz de 0,053mm para un vaso de precipitado o una placa de Petri.

Precaución de no tirar este material, pues es donde se encuentran las esporas.

El material ya puede ser observado en microscopio estereoscópico (lupa).

Centrifugar a 2000rpm durante dos minutos. En este segundo centrifugado en sacarosa, las esporas flotan en el sobrenadante y las partículas más pesadas quedan decantadas en el fondo del tubo. No haga movimientos bruscos para no suspender las partículas decantadas. Verter el sobrenadante cuidadosamente sobre el tamiz de 0,053mm para no arrastrar las partículas decantadas en el fondo del tubo.

Añadir a los tubos la solución 45, 50 o 60% de sacarosa hasta aproximadamente 40mL suspendiendo el precipitado revolviendo con una espátula. Pesar y estandarizar los tubos añadiendo sacarosa hasta que queden con el mismo peso.

A partir de esta etapa el proceso de extracción no podrá ser interrumpido y se recomienda que se haga lo más rápido posible, ya que las esporas pueden deshidratarse por ósmosis. Además, la sacarosa puede inhibir la germinación de las esporas.

Centrifugar a 3000 rpm durante 3 minutos. En esta primera centrifugación en agua, las esporas quedan decantadas en el fondo del tubo y las partículas más leves quedan en el sobrenadante. No haga movimientos bruscos para no suspender nuevamente las esporas. Retirar los tubos y desechar cuidadosamente el sobrenadante sin mover las partículas sólidas decantadas en el fondo del tubo.

Con la ayuda de una piseta con agua transferir el material retenido en tamiz de malla 0,053mm en un tubo de centrífuga de 50 mL. Pesar los tubos y estandarizarlos añadiendo agua hasta que queden con el mismo peso.

Repetir los procedimientos (2 y 3) de mezclar suspendiendo el suelo en el agua y vertiendo la suspensión por los tamices varias veces hasta que el agua quede aparentemente limpia.

Verter el agua del cubo o de la licuadora sobre el juego de tamices (tamiz de malla 0,42mm sobre el tamiz 0,053mm).

Sólo la suspensión debe ser vertida, en el cubo o vaso de licuadora quedan retenidas las partículas más grandes del suelo.

Humedecer y romper los terrones de suelo presionándolos con los dedos contra la pared del cubo y completar el volumen del cubo con agua suspendiendo el suelo con la ayuda de una varilla, o simplemente, batir en licuadora.

Transferir 50mL de la muestra de suelo / sustrato a un cubo de plástico o al vaso de licuadora.